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細(xì)胞培養(yǎng)中，黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?

黑點(diǎn)已經(jīng)產(chǎn)生了，如何進(jìn)行處理?如果判定黑點(diǎn)是污染，請(qǐng)及時(shí)將細(xì)胞處理后丟棄。其他情況，可參照以下進(jìn)行：如果是懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞上清慢速離心(500-600rpm/min，5-6min)并更換新的培養(yǎng)瓶;如果是貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS洗2-3遍，洗的時(shí)候，輕輕拍打培養(yǎng)瓶，讓貼壁不牢的碎片和顆粒脫落，再棄去PBS，消化時(shí)先加低濃度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，讓細(xì)胞間隙中的顆粒和碎片脫落下來，去掉低濃度胰酶，然后正常消化細(xì)胞，將收集的細(xì)胞懸液慢速離心(500-600rpm...

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27個(gè)細(xì)胞傳代培養(yǎng)常見問題匯總

1、一般拿到細(xì)胞后，應(yīng)該注意什么?收到細(xì)胞先不開蓋,用酒精將整個(gè)細(xì)胞瓶外壁進(jìn)行消毒，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后(看細(xì)胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各兩張)，排除細(xì)胞本身污染的情況。2、何時(shí)須更換培養(yǎng)基?視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，常規(guī)細(xì)胞2-3天更換培養(yǎng)基。3、細(xì)胞何時(shí)進(jìn)行傳代較好?一般情況下細(xì)胞生長(zhǎng)至*匯合后就應(yīng)該傳代，所有細(xì)胞生長(zhǎng)都有一個(gè)要求不宜...

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如何確認(rèn)細(xì)胞交叉污染

交叉污染雖不如微生物污染普遍，但與HELA細(xì)胞及其他生長(zhǎng)迅速的細(xì)胞系間廣泛的交叉污染是個(gè)明確的問題，會(huì)造成嚴(yán)重后果。從聲譽(yù)好的細(xì)胞庫(kù)獲取細(xì)胞系、定期檢查細(xì)胞系性質(zhì)及采用良好的無菌技術(shù)有助于避免交叉污染。通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可確認(rèn)有無交叉污染。血清與培養(yǎng)基通常血清的添加比例為10%，當(dāng)然也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長(zhǎng)速率適當(dāng)增加或減少添加比例。在更換血清品牌或者批次時(shí)，最好需對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響。對(duì)于培養(yǎng)基，目前商品化的比較成熟，穩(wěn)定性也較好。如...

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WinSera胎牛血清的儲(chǔ)存和融化方法~

儲(chǔ)存條件：-20°C凍存。胎牛血清一次解凍后，應(yīng)按單次習(xí)慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清，應(yīng)在一周內(nèi)用完。為保證細(xì)胞培養(yǎng)的最佳效果，血清和培養(yǎng)基的配置，應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”原則。配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免反復(fù)凍融，避免在4°C或更高溫度儲(chǔ)存過久，否則會(huì)破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。血清融化專業(yè)方法：目的;更好保留血清中活性成分，使細(xì)胞培養(yǎng)更穩(wěn)定。推薦血清廠家專業(yè)融化方法（此方法國(guó)際通用，適用于所有種類的血清）：操作溫度100ml5...

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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題大集合~

01、復(fù)蘇細(xì)胞的正確打開方式?復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。凍存細(xì)胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動(dòng)冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化(不要超過3分鐘)。解凍后的細(xì)胞可以直接接種到含有*培養(yǎng)液的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中直接進(jìn)行培養(yǎng)，24小時(shí)后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。如果細(xì)胞對(duì)冷凍保護(hù)劑特別敏感，解凍后的細(xì)胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護(hù)劑，然后再接種到含*生長(zhǎng)培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。注：操作時(shí)戴好手套，防止凍傷;帶上防護(hù)眼鏡可以防止液氮罐...

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細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決辦法

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及其解決辦法1.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。2.何時(shí)須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法...

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外泌體樣本收集

外泌體是由細(xì)胞分泌的納米級(jí)膜性小囊泡，直徑約30~150nm。外泌體來源多樣，廣泛存在并分布于各種生物液體中，富含來源細(xì)胞的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸，參與細(xì)胞間的信息交流。不同病理和生理?xiàng)l件下，外泌體的內(nèi)容物不盡相同，因此外泌體可以很好地反映生物體的疾病與健康狀態(tài)。此外，外泌體特殊的膜結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)其內(nèi)容物如RNA（microRNA、mRNA、lncRNA、circRNA）免受酶的降解，保證其能在各類體液中被穩(wěn)定檢測(cè)到，因此外泌體是研究各種疾病的良好生物學(xué)材料，可作為腫瘤潛在的bio...

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國(guó)產(chǎn)WINSERA胎牛血清是你明智選擇

國(guó)產(chǎn)WINSERA胎牛血清是你明智選擇選擇胎牛血清的標(biāo)準(zhǔn)血源可追溯性選擇來源安全、可追溯的FBS對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來說至關(guān)重要。目前市面上存在較多以假亂真的FBS產(chǎn)品，科研工作者對(duì)血清的真實(shí)產(chǎn)地、來源難以鑒別。對(duì)此，國(guó)際血清行業(yè)協(xié)會(huì)（ISIA）實(shí)施了供應(yīng)鏈可追溯性的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以確保FBS的質(zhì)量和安全性。例如，F(xiàn)BS供應(yīng)商是否保留原產(chǎn)地的可追溯記錄？是否持有血清生產(chǎn)各階段處理、運(yùn)輸和商業(yè)交易的文件？這些都是判斷FBS可追溯性需要考慮的因素。產(chǎn)品檢測(cè)每款FBS在生產(chǎn)上市之前，必須經(jīng)過嚴(yán)...

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