人結直腸癌細胞熒光素酶標記 LOVO+LUC

細胞代號：LOVO+LUC

細胞培養條件：F12K+10%FBS+1%P/S   

細胞生長形態：貼壁生長

培養基中氣泡對細胞貼壁的影響

在培養細胞時，普通手動移液器加細胞液過程可能會由于操作速度過快造成氣泡產生，氣泡會破壞細胞附著，導致細胞培育的效果不佳，產生誤差，所以在移液時需要進行練習，以避免氣泡生成，同時注意消除吸頭內的空氣，最好是使用外置活塞式分液器，因為外置活塞式分液器可以在不產生氣泡的情況下轉移易氣泡液體。

正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無污染，細胞進入培養器皿后，立即放入培養箱中，使細胞盡早進入生長狀態。

超凈工作臺內的無菌工作規范

細胞培養是一項十分嚴謹且專業的實驗過程，超凈工作臺原理是在特定的空間內，室內空氣經預過濾器初濾，由小型離心風機壓入靜壓箱，再經空氣高效過濾器二級過濾，從空氣高效過濾器出風面吹出的潔凈氣流具有一定的、均勻的斷面風速，可以排除工作區原來的空氣，將塵埃顆粒和生物顆粒帶走，以形成無菌的高潔凈的工作環境。所以實驗一般在超凈無菌工作臺上進行，所以超凈工作臺一定要保持整潔衛生規范。超凈工作臺上應該采用從左到右，從潔凈的實驗空間到放置實驗廢品的臟污空間擺放。

如果在實驗過程中隨意擺放過多實驗器材，容易阻擋超凈工作臺的氣道流通，形成湍流，容易使污染物進入容器，讓細胞受到污染。

正確管理CO?培養箱

CO?培養箱是存儲細胞和培養細胞生長的實驗器材，實驗人員在實驗過程中難以避免需要擺放細胞培養皿進CO?培養箱，這個時候就需要注意，實驗人員應該避免頻繁的開關CO?培養箱，讓箱內的實驗環境受到影響無法及時恢復，導致細胞培養生長受到干擾。同時，在CO?培養箱內擺放的樣品需要注意規范好擺放的位置并做好正確的標記，做到培養箱門快開快關，一般的實驗室培養箱往往多人合用，建議合用的培養箱配置內外門，大化程度減少開關門對培養箱環境的影響，避免實驗樣品混淆和交叉污染的風險。

CO?培養箱的常規維護和消毒

CO?培養箱需要保持濕潤的環境，所以需要定期（1-2周）將盛液盤整體移出，將殘留的水清空，用70%的酒精或異丙醇溶液擦拭消毒，待干燥后添加無菌蒸餾水，再放回培養箱內。

CO?培養箱一般需要1個月進行一次消毒清理，實驗人員需要按規范拆除培養箱的擱板、擱架及水盤，將酒精噴灑于布上，再進行腔體的清潔，培養箱內盡量避免死角的存在，擦拭腔體內每個位置，再將移除的配件擦拭清潔后，安裝到位。

目前自動化設備已代替人工復雜操作，可通過運行高溫消毒程序，有效避免污染發生。

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人乳腺癌細胞熒光素酶標記 MDA-MB-231+LUC

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人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC

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小鼠黑色素瘤細胞熒光素酶標記 B16-F10+LUC

小鼠結腸癌細胞熒光素酶標記 CT26+LUC

小鼠膠質細胞瘤熒光素酶標記 GL-261+luc

小鼠肝癌細胞熒光素酶標記 HEPA1-6+LUC

小鼠卵巢上皮癌細胞熒光素酶標記 ID8+LUC

小鼠骨肉瘤成骨細胞熒光素酶標記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC

小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 LLC+LUC

小鼠結腸癌細胞熒光素酶標記 MC38+LUC

小鼠腦神經瘤細胞熒光素酶標記 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌細胞熒光素酶標記 panc02+LUC

小鼠前列腺癌細胞熒光素酶標記 RM-1+LUC

大鼠腦膠質瘤細胞綠色熒光標記 C6+LUC

細胞復蘇

細胞復蘇和凍存講究“慢凍快溶"，復蘇時一定要將凍存在液氮或-80℃中凝固的細胞凍存液快速融化至37℃，使胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。

復蘇準備

?打開水浴鍋加熱至37℃。

? 超凈臺上放好離心管（一般15ml的），細胞培養瓶，移液管，紫外滅菌至少20至30分鐘，吹風5至10分鐘除去臭氧。

?37℃預熱好要復蘇細胞的培養液，也可以不用預熱培養液，根據細胞情況選擇。

?向離心管中加約5至10ml培養液，從液氮罐或-80℃中取出凍存細胞，立即將凍存管放入37℃水浴中并輕輕搖動，待融化后（約2min即可）立即將解凍的細胞轉移至含培養液的離心管中，800-1000rpm下離心5min，棄上清，加適量*培養液輕輕吹打重懸細胞后轉移至細胞培養瓶中，輕晃使瓶底液體分散均勻，標好細胞名稱、代數、復蘇日期，顯微鏡下觀察后放入37℃，5%CO2培養箱中。一般貼壁細胞過夜即可貼壁，換液和傳代時間根據不同細胞生長情況而定。

細胞復蘇注意事項

?復蘇時動作要快，盡量減少胞內形成冰晶，影響復蘇后細胞活率。

? 融化時盡量不要碰到管口，以免容易造成污染。

?若一次性需要復蘇細胞很多，可以分批水浴解凍，防止傳熱不佳使得細胞融化時間延長。

?若需要同時復蘇好幾種細胞，提前在離心管和培養瓶上做好標記，或記住自己擺放的位置，不要弄混亂。