細胞培養過程中應該注意哪些問題？

#1細胞培養步驟一般包括：解凍、培養、分盤、凍存。基本上都遵循這個步驟，細胞轉染過程，我們往往發生在步驟3，在做細胞功能性實驗時，往往在步驟2，解凍和凍存就是細胞的儲藏和分離的過程。

#2首先我們要獲得細胞，一般受大家比較認可的細胞庫有1962年ATCC建立的CELL LINES、中科院、DSMZ等機構。

#3細胞解凍要求37度快速解凍，另外就是注意不同細胞的培養條件。

#4同規格培養器皿所需要的細胞生長密度也不同，如下圖：

#5細胞生長會產生各種代謝廢物，造成培養液PH變化，所以培養過程中，遇到細胞培養液變化較為明顯時，要及時更換培養液，保證細胞的正常生長。

#6細胞離心時也要注意，強烈的離心力會使得細胞大量積聚離心管底部，造成大量細胞擠壓破碎，一般不要超過300g，5-10min即可。

#7此外離心機分為固定轉角離心機和自由轉角離心機，固定轉角的離心機會使細胞堆積在側壁，容易造成一些細胞離心不充分，造成細胞的丟失，相反，自由轉角離心機能很好解決這個問題所以，我們一般盡量使用自由轉角離心機。

1、細胞系（細胞株）

細胞系是來自多細胞生物體的細胞群體，其通常不會無限增殖，但是由于突變，逃避了正常細胞的衰老，從而可以持續分裂的一種細胞的集合。

因此，細胞可以在體外長時間生長。細胞系是研究多細胞生物體的生物化學和細胞生物學的非常重要的工具，例如信號通路、腫瘤殺傷、細胞增殖、細胞周期、突變分析、基因表達、蛋白表達、細胞分化等等。此外，永生化的細胞系也已經在生物技術中得到應用，比如建立新來源、新突變的細胞系。

2、克隆細胞株

從一個經過生物學鑒定的細胞系用單細胞分離培養或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群，稱細胞株。再由原細胞株進一步分離培養出與原株性狀不同的細胞群，亦可稱之為亞株。

3、二倍體細胞

細胞群染色體數目具有與原供體二倍細胞染色體數相同或基本相同（ 2n 細胞占 75%或 80%以上）的細胞群，稱二倍體細胞培養。如僅數目相同，而核型不同的即染色體形態有改變者為假二倍體。二倍體細胞在正常情況下具有限生命期，故屬有限細胞系。

但隨供體年齡和組織細胞的不同，二倍體細胞的壽命長短各異。人胚肺成纖維細胞可傳50代±10代，人胚腎只有8—10代，人胚神經膠質細胞15—30 代；如從老齡個體取材培養，則細胞生存期更短。由不同年齡供體取材建立的二倍體細胞系可供研究衰老之用。為保持二倍體細胞能長期被利用，一般在初代或 2— 5 代即大量凍存作為原種，用時再進行增殖培養，用后再繼續凍存，可供長期使用和延緩細胞的衰老。

4、初代培養（原代細胞培養）

原代培養是從供體獲取組織后的第一次培養，其優點是：組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內狀態。原代培養所在機能上的改變，主要是表型上的改變，不一定為體細胞突變。從理論上講，人們有可能創造出一種條件，使原代培養細胞恢復體內時的機能，因此原代培養細胞是研究基因表達的理想系統。采用原代培養細胞做實驗，如藥物測試等效果也很好；原代培養也是建立各種細胞系（株）必須經過的階段。有一點也要注意到，原代培養的組織是由多種細胞成分組成的，比較復雜。

即使培養的是較純的單一類型的細胞，如上皮或成纖維細胞，也仍存在著異質性，在分析細胞生物學特性時仍有一定困難。此外由于不同供體不同批次差異及其它一些原因，細胞生長效果有時也會不一致。

WINSERA®特級胎牛血清適合培養哪些細胞？

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2、血清如何保存, 可以放多久？

3、貯藏溫度≤-15℃，可長時間保存； 4℃存放時，請勿超過一個月。

4、血清溶解以后，出現沉淀怎么辦?

5、若您欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內，以400-600g離心5min，上清液即可加入培養基內一起培養。 我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物， 一方面它可能會阻塞您的過濾膜；另一方面，過濾血清這種行為可能會導致血清中部分營養成分的流失。