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當前位置:首頁技術文章細胞信號通路

細胞信號通路

更新時間:2020-03-31點擊次數:3705

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    淋巴細胞是在血液中循環的五種白細胞之一。雖然成熟的淋巴細胞看起來都很相似,但它們的功能卻非常不同。zui豐富的淋巴細胞有:B淋巴細胞(通常稱為B細胞)和T淋巴細胞(也稱為T細胞)。B細胞不僅在骨髓中產生,而且在那里成熟。每個B細胞都是針對特定抗原的。結合的特異性存在于抗原的BCR (B細胞受體)中。它們是完整的膜蛋白,以成千上萬個相同拷貝的形式暴露在細胞表面,是在細胞遇到抗原之前產生的。

B細胞受體復合體通常由一個抗原結合亞基(膜免疫球蛋白或MIg)和一個信號單元組成,抗原結合亞基由兩個IgHs(免疫球蛋白重鏈)和兩個IgLs(免疫球蛋白輕鏈)組成,信號單元則是Ig-Alpha(CD79A)和Ig-Beta (CD79B)通過二硫鍵連接的異質二聚體蛋白。

BCR(抗體)的重鏈基因片段為:51 VH片段-每個片段編碼抗體N端的大部分區域,包括前兩個(但非第三個)高變區;25 DH(= “多樣性”)基因區段,其編碼第三高變區的一部分,6 JH(=“ joining”)基因區段,其編碼BCR V區的其余部分(包括第三高變區的其余部分)和9 CH 基因片段,編碼BCR(及其衍生的抗體)的C區。1 μ C基因片段編碼IgM的C區,1 δ編碼IgD,4 γ基因片段編碼4中IgG,1 ε 編碼IgE,2 α基因片段編碼兩種IgA。所有這些基因片段都聚集在14號染色體上的一個復雜位點上。在B細胞分化的過程中(在可能遇到抗原之前很久),這個位點的DNA被切割和重組,形成完整的重鏈基因。然后這個基因可以被轉錄成mRNA,mRNA又被翻譯成重肽鏈。所有的mIg亞型都有非常短的細胞質尾部。mIgM和mIgD都有一個胞質結構域,其長度只有3個氨基酸。mIg的胞質尾部太短,不能與胞內信號分子結合。由于mIg始終與Ig-alpha/Ig-beta異源二聚體共同形成B細胞受體復合物(BCR),因此該異源二聚體的兩個分子與一個mIg結合形成一個BCR。Ig-alpha/Ig-beta異二聚體行使復合物的信號轉導功能。Ig-alpha其胞質結構域較長,含有61個氨基酸;Ig-beta其胞質結構域含有48個氨基酸。

BCR有wei一的結合位點。該位點與抗原的一部分結合,稱為抗原決定簇或表位。結合取決于受體表面和表位表面的互補性。這種結合是由非共價力引起的。在缺乏特異性抗原的情況下,成熟的B細胞只能在外周血循環中存活幾天。在這段時間內不接觸抗原的細胞發生凋亡。這對于維持外周B淋巴細胞的zui佳循環是必要的。當受體位于b淋巴細胞的細胞表面時,它的作用是傳遞細胞內調節細胞生長和分化的信號,并與抗原結合,產生免疫應答。大多數B細胞抗原是T細胞依賴的。換句話說,B細胞需要與Th淋巴細胞直接接觸,同時也需要接觸到Th淋巴細胞的細胞因子才能被*激活。T獨立抗原比較少。與T無關的抗原zui著名的例子之一是脂多糖(LPS)。在低濃度時,LPS刺激特異性抗體(LPS特異性)的產生,但在高濃度時,它會導致B細胞多克隆活化。無論B細胞的抗原特異性如何,B細胞的多克隆活化都會導致大量B細胞的增殖和分化。細菌細胞壁多糖和細菌鞭毛蛋白也可作為T獨立抗原。細胞壁多糖的特征是具有重復的單糖亞基,而細菌鞭毛蛋白是一種重復的聚合蛋白。據認為,這些重復抗原通過廣泛的交聯膜結合的Ig刺激B細胞。抗體對這些抗原的反應是特異性的。這個過程不需要T細胞直接接觸,但需要存在某些T細胞因子。抗原與B細胞受體復合物結合產生的信號導致B細胞的生長和增殖,并產生效應細胞的擴增克隆,產生抗原特異性免疫球蛋白。抗原激活B細胞受體也會產生記憶細胞,這些細胞會持續循環,在未來受到相同抗原的刺激后,產生更快速的免疫反應。結合抗原分子通過受體介導的內吞作用被B細胞吞噬。抗原被消化成片段,然后被聚集在緊鄰II類組織相容性分子的細胞表面。

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BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 優等胎牛血清FBS A15-151。

BI優等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES級別胎牛血清 04-002-1A 、BI 間充質胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P ;

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Gemini優等胎牛血清 900-108 、Gemini特級胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。 

Sigma 特級胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1。

原代動物細胞培養:

1、實驗材料要新鮮,從活體分離材料后要低溫保存,并盡快進行細胞分離實驗。

2、無菌操作。操作時用的培養液,可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈霉素。

3、用酶法分離細胞時,注意酶液的濃度和控制消化時間。

貼塊法分離細胞時,注意動作要輕柔,不要傷到細胞組織,組織塊邊緣盡量平整有利于細胞游離。

4、培養液的選擇。不同的細胞有對培養液中營養的要求不同,根據所分離細胞的特性選擇。

傳代細胞培養:1、無菌操作;2、控制消化時間;3、及時關注細胞生長狀態。

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