人乳腺癌順鉑耐藥株MCF7/DDP細(xì)胞培養(yǎng)手冊

細(xì)胞株名稱：MCF7/DDP 人乳腺癌順鉑耐藥細(xì)胞

貨號：WS148

種屬：人

組織來源：乳腺癌

生長特性：貼壁生長

形態(tài)特征：上皮細(xì)胞

微生物及支原體檢測：陰性

安全性：所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)基：90%RPMI-1640+10%胎牛血清+500ng/ml DDP

蘇州千舍生物實(shí)驗(yàn)室所出售細(xì)胞，均含有STR鑒定報(bào)告，保證細(xì)胞好狀態(tài)發(fā)貨~~ 

一、 細(xì)胞收貨通用流程

1. 檢查包裝

   · 收到細(xì)胞后，立即檢查外包裝及培養(yǎng)瓶有無破損、漏液。

   · 如有任何異常，立即拍照記錄（包裝和顯微鏡下狀態(tài)），并聯(lián)系客服。

2. 顯微鏡下初步觀察

   · 用酒精棉球che底消毒培養(yǎng)瓶表面。

   · 無需打開瓶蓋，直接在顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)、密度并檢查是否有微生物污染（如細(xì)菌、真菌）。

   · 拍照記錄不同倍數(shù)下的細(xì)胞形態(tài)和是否有污染，作為售后憑證。

3. 穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

   · 將整個(gè)培養(yǎng)瓶（瓶蓋擰緊）放入37°C、5% CO?培養(yǎng)箱中，靜置2-3小時(shí)，讓細(xì)胞從運(yùn)輸應(yīng)激中恢復(fù)。

4. 處理決策

   · 靜置后，參照附帶的細(xì)胞操作指南，根據(jù)細(xì)胞密度和狀態(tài)進(jìn)行一次傳代或凍存。

   · 隨貨資料：請核對并妥善保管細(xì)胞說明書、培養(yǎng)操作指南、細(xì)胞鑒定報(bào)告及支原體檢測報(bào)告。

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二、 常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理細(xì)則

di一步：收貨與檢查

· 執(zhí)行di一部分（通用流程） 的第1、2步。

第二步：更換培養(yǎng)基與細(xì)胞收集

· 消毒瓶身后，在超凈工作臺中打開瓶蓋。

· 更換為隨貨贈送的wan全培養(yǎng)基。

· 特別注意：如果顯微鏡下發(fā)現(xiàn)有較多細(xì)胞懸浮，需將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至無菌離心管，離心（如1200rpm, 5min）收集細(xì)胞，棄去舊培養(yǎng)基。

· 完成更換或收集后，將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱繼續(xù)靜置2-3小時(shí)。

第三步：靜置后處理（根據(jù)細(xì)胞密度）

三、 細(xì)胞傳代操作步驟

A. 貼壁細(xì)胞傳代

1. 準(zhǔn)備：吸棄舊培養(yǎng)基。

2. 沖洗：沿培養(yǎng)瓶側(cè)壁緩慢加入PBS等沖洗液，輕輕晃動后吸棄，去除殘留血清。

3. 消化：加入預(yù)熱的胰酶（如T25加1ml），輕輕晃動使胰酶覆蓋所有細(xì)胞。

4. 孵育：室溫消化約2分鐘（時(shí)間因細(xì)胞而異）。

5. 觀察：在顯微鏡下觀察，直至≥90% 細(xì)胞變圓、脫落。若未達(dá)到，可每30秒檢查一次。

6. 終止：當(dāng)細(xì)胞充分解離后，立即加入兩倍胰酶體積的預(yù)熱的wan全培養(yǎng)基終止消化。

7. 吹打：用移液器輕輕吹打瓶壁，使細(xì)胞wan全脫落并分散成單細(xì)胞懸液。

8. 離心：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，200 × g 離心 3-5分鐘，棄上清。

9. 重懸與接種：用少量新鮮wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀，按適當(dāng)比例稀釋后，接種到新的培養(yǎng)瓶中。

10. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱。若使用普通瓶蓋，務(wù)必旋松瓶蓋以利氣體交換。

B. 懸浮細(xì)胞傳代

1. 收集與離心：將細(xì)胞懸液全部轉(zhuǎn)移至離心管，1000 rpm 離心 5分鐘，棄上清。

2. 重懸：加入1-2ml新鮮wan全培養(yǎng)基，輕柔重懸細(xì)胞。

3. 接種：按1:2的比例將細(xì)胞懸液傳至新T25培養(yǎng)瓶，并補(bǔ)充總培養(yǎng)基量至5-8ml。

4. 培養(yǎng)：放入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

四、 特殊問題處理：運(yùn)輸中脫落的貼壁細(xì)胞

部分貼壁不牢的細(xì)胞在運(yùn)輸中會脫落，屬正?，F(xiàn)象，按以下步驟處理：

1. 收集：將瓶內(nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

2. 清洗：用PBS重懸細(xì)胞，再次離心（1200rpm, 3-5min）棄去PBS。

3. 消化：加入約1ml 0.25%胰酶，輕柔混勻（勿劇烈吹打），放入培養(yǎng)箱消化1-2分鐘。

4. 終止與分散：取出后輕輕吹打使細(xì)胞團(tuán)分散，迅速加入3-5mlwan全培養(yǎng)基終止消化，離心（1200rpm, 3-5min）棄上清。

5. 重懸與接種：加入5mlwan全培養(yǎng)基重懸，按比例接種到新培養(yǎng)瓶/皿中。

6. 觀察：鏡下觀察。若細(xì)胞為單顆或僅有3-5個(gè)細(xì)胞的小團(tuán)，可正常培養(yǎng)，待其貼壁生長。--

五、 售后服務(wù)政策摘要

重要提示：任何異常問題，di一時(shí)間拍照并與我們聯(lián)系是獲得售后支持的關(guān)鍵。