鴨腦微血管內皮細胞永生化如何培養？

貨號：WS-003Y（免疫熒光鑒定）

細胞詳述

腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦。大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。

腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產生很高的跨內皮阻抗，延遲細胞旁的通量；腦微血管的內皮細胞間銜接得十分緊密，不象其他組織的血管內皮細胞那樣有較大的縫隙腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構，其液相物質胞飲水平較低；腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統，從而產生 “兩極分化"的表現型。 與外周內皮細胞相同，大腦微血管內皮細胞表面表達細胞粘附分子，調控白細胞進入大腦。由于微血管內皮細胞的器官特異性，內皮細胞通常取源于疾病研究的相關組織。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養基是維持培養基，不能用來培養細胞。

細胞特性

1) 組織來源于實驗動物的腦組織。

2) 細胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽性。

3) 經鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規則細胞，貼壁培養。

產品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2) T-25培養瓶充滿wan全培養基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

推薦培養基

我們推薦使用鴨腦微血管內皮細胞-永生化細胞專用培養基（WS-003Y-001A）作為體外培養鴨腦微血管內皮細胞的培養基。

貼壁細胞的傳代培養

準備和消化：在無菌條件下操作，將舊的培養基去除后，用PBS溶液輕輕潤洗細胞，去除殘留的血清成分。接著加入適量的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃、5% CO2培養箱中消化2-3分鐘，直至細胞表面變得圓滑和亮澤。隨后加入含有10% FBS的培養基終止消化作用，輕柔吹打或振蕩培養皿，使細胞懸浮在培養基中。

收集和傳代 ：將處理好的細胞懸液轉移至離心管中，進行輕度離心（室溫，1000rpm，5分鐘），以收集細胞。隨后，吸去上清液，加入適量的wan全培養基重新懸浮細胞。按照預定的傳代比例（通常為1:2或1:3），將懸液中的細胞分別移植到新的培養皿中。標記新培養皿上的細胞信息后，輕輕搖勻，將培養皿放置于37℃、5% CO2培養箱中進行進一步的培養。

懸浮細胞或半貼壁細胞的傳代培養

直接傳代：將懸浮細胞在培養皿中沉淀后，吸取部分上清液，然后用吸管輕柔吹打以形成細胞懸液。最后將懸液轉移到新的培養皿中繼續培養。這種方法適合于不需要酶消化的細胞傳代，操作簡便，但可能會造成細胞損傷和損失。

離心方法：先將懸浮細胞懸液離心，去除上清液后用新的培養基重懸細胞。然后根據需要的傳代比例將細胞轉移到新的培養皿中。這種方法適合于細胞數量較多時，通過離心可以有效收集和分離細胞，有利于細胞的健康和穩定傳代。

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