ELISA試劑盒又稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，用于對(duì)液體樣本中的目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量檢測。隨著國家對(duì)科研項(xiàng)目的重視，在科研單位和廣大科研類院校也越來越受歡迎。

ELISA試劑盒之所以受歡迎和它自身的優(yōu)點(diǎn)是分不開的。

首先適合檢測的樣本很廣泛包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本，具體根據(jù)試劑盒說明書決定，通常檢測靈敏度比較高。

其次ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來的一種微量分析技術(shù)。酶標(biāo)記抗原或抗體以后，既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性，也不改變酶本身的活性。

最后因?yàn)镋LISA試劑盒操作不依賴昂貴的儀器，且具備準(zhǔn)確性高、反應(yīng)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，所以適合大批量的檢測，就連食品檢測行業(yè)ELISA試劑盒也備受青睞。

目前市場上的ELISA試劑盒質(zhì)量參差不齊，如何去挑選適合自己的試劑盒就顯得特別重要，具體有以下幾點(diǎn)可供參考。

除試劑盒特別說明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本種類有：血清和血漿（不同抗凝劑），細(xì)胞上清，和細(xì)胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用。

也就是標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，對(duì)于濃度很高的樣本，可以先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索到比較好的稀釋倍數(shù)后再大量測定樣本。

ELISA試劑盒的特異性與試劑盒的關(guān)鍵組分--抗體對(duì)有關(guān)。若抗體對(duì)中之一為多抗，另一個(gè)必須為單抗，如有條件最好是使用雙單抗。

靈敏度反映的是試劑盒檢出被檢物質(zhì)的低量的能力，用戶可根據(jù)自己樣本中待檢指標(biāo)的含量/濃度選擇合適的試劑盒，如果待檢指標(biāo)含量很低，一般的試劑盒不能滿足要求，建議選擇高敏的ELISA試劑盒。

科學(xué)實(shí)驗(yàn)講求重復(fù)性，ELISA試劑盒，其板內(nèi)和板間變異系數(shù)應(yīng)該控制在15%以內(nèi)。

試劑盒在保證高質(zhì)量數(shù)據(jù)的情況下，實(shí)驗(yàn)時(shí)間越短，操作越便利，越容易受到用戶歡迎。

一個(gè)品牌不光要有度，更重要的是美譽(yù)度。通過行業(yè)調(diào)查公司以及網(wǎng)絡(luò)，相關(guān)宣傳資料等可以找到美譽(yù)度高的ELISA試劑盒供應(yīng)商，這個(gè)反映的不僅是產(chǎn)品質(zhì)量的問題，對(duì)供應(yīng)商的售前售后服務(wù)也是一個(gè)非常嚴(yán)格的檢驗(yàn)。

常見的高美譽(yù)度品牌進(jìn)口的有R&D、Raybiotech、Merck-Millipore、Sigma-Aldrich、Thermo等，國產(chǎn)的有義翹神州、博奧森、neobioscience等。

產(chǎn)品的文獻(xiàn)引用特別是高質(zhì)量的SCI文章引用是很多用戶都關(guān)心的問題，這是業(yè)界對(duì)產(chǎn)品認(rèn)可的一個(gè)非常重要指標(biāo)，而且對(duì)相關(guān)用戶的科研有一定的借鑒作用。

ELISA盒子使用技巧

樣本的準(zhǔn)備：盡量使用新鮮樣本，不使用有溶血，被細(xì)菌污染、標(biāo)本保存時(shí)間過長和標(biāo)本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標(biāo)本，如不能立即測定，5天之內(nèi)應(yīng)4℃保存，對(duì)于1周后檢測的樣本應(yīng)低溫凍存；做好分裝，長時(shí)間凍存的樣本避免反復(fù)凍融。

仔細(xì)閱讀說明書：所有操作嚴(yán)格按照說明書。

不同批次的試劑不要混用，檢查各組分的有效期。

預(yù)包被的酶標(biāo)板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需溫度，預(yù)防后續(xù)實(shí)驗(yàn)中由于孵育溫度或是時(shí)間不夠充分，而將一些弱陽性樣本不能檢出。

待測樣本加樣：待檢樣本過多時(shí)，建議分批操作；需要稀釋的樣本提前做好稀釋，注意選對(duì)合適稀釋液；控制好加樣時(shí)間，避免加樣費(fèi)時(shí)過長造成誤差；注意加樣角度，垂直加入孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個(gè)移液頭，防止交叉污染。

溫育和洗板：溫育時(shí)間和溫度一般根據(jù)試劑盒的說明書進(jìn)行選擇。①手工洗板時(shí)，拍板時(shí)要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復(fù)合物脫離；②洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)經(jīng)常檢查沖洗頭是否通暢。

顯色：市售ELISA試劑盒中，一般是以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物的顯色液，反應(yīng)條件為37℃或室溫反應(yīng)15～30 min。顯色反應(yīng)需要避光。

讀數(shù)和數(shù)據(jù)分析：終止后讀取結(jié)果盡量在15min內(nèi)完成，讀取OD值時(shí)酶標(biāo)儀需先預(yù)熱15～30 min再進(jìn)行。標(biāo)曲的相關(guān)系數(shù)（R2）一般需要大于0.99。

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